高品质分子诊断原料,助力微阵列芯片技术在分子诊断的应用

微阵列技术是一种通用的实验室方法,将数千至百万级的已知核酸片段以阵列的形式结合到固体表面,即为“芯片”,将从研究样本 (如细胞或组织) 中提取的 DNA 或 RNA 与芯片一起孵育,样本和芯片上固定片段的互补碱基配对、结合,并产生可由专用设备检测到的荧光。

微阵列技术可用于科学和临床研究的各种目的,如检测基因表达、SNPs 基因分型等1。在分子诊断应用中,具有检测速度快、检测通量高等优势。

图 1. 微阵列技术芯片

(图片来自:National Human Genome Research Institute)

 

Medix Biochemica 助力微阵列芯片技术在分子诊断的应用

Medix Biochemica 分子诊断原料于微列阵技术的应用,具有更高灵敏度及特异性,可支持多重扩增检测,并且在更短的时间内获得更出色的检测结果。

在本应用研究中,基于微阵列技术,将 Medix Biochemica 的 PlexTaq® 5x qPCR Multiplex Master Mix (货号:#4000) 同市场同类试剂进行比较,分别对结核分枝杆菌病原进行检测。

以人基因组和合成结核分枝杆菌基因为样本,β-actin、KRAS 和 RRDR (结核分枝杆菌利福平耐药决定区域) 为靶点进行多重 PCR 扩增,扩增后产物引入特异性报告基因,通过微阵列芯片对 Cy3 标记的扩增产物进行检测 (图 2)。
图 2. 微阵列技术检测流程
实验结果显示,在硅基微阵列芯片上,PlexTaq® 5x qPCR Multiplex Master Mix 和其他多重检测 Master Mix 均可以实现三重扩增,但是 PlexTaq® 5x qPCR Multiplex Master Mix 表现更突出,其 β-actin 荧光强度明显更优 (图 3B,3C),PCR 反应时间更快,较其它组节省 20 分钟 (图 3A)2

图 3. PlexTaq® 5x qPCR Multiplex Master Mix 和市场同类试剂的微阵列检测结果


针对RNA类样本检测微阵列技术的应用,某欧洲IVD公司以 β-Actin 为靶基因、对 Medix Biochemica 的 Volcano3G® RT-PCR Probe 2x Master Mix (货号:#6101) 和市场同类试剂进行了对比测试。

结果显示,相较于同类产品,Volcano3G® RT-PCR Probe 2x Master Mix 检测的整体反应时间更短 (图 4A),荧光强度更高 (图 4B);即使对于粗样本 (图 4B,实验组 2) 依然具有更高的特异性及灵敏度,可以用更简便的操作、在更短时间、获得更可靠的结果3

图 4. Volcano3G® RT-PCR Probe 2x Master Mix 和市场同类试剂于微阵列芯片应用的结果

 

实验组 1:收集唾液并进行 RNA 抽提,以 2μl 纯化的 RNA 为模板进行 RT-qPCR。
实验组 2:以 20μl 无核酸酶水对 50μl 唾液进行稀释,并在 95℃ 加热 3 分钟,取 5μl 粗裂解物作为 RNA 模板进行 RT-qPCR。

 

 

Medix Biochemica 分子诊断原料推荐

1. PlexTaq® 5x qPCR Multiplex Master Mix (货号:#4000)

· 5 倍浓度预混液,为多重检测需求提供更多优化空间;

· 稳定且高效多重反应,可至30重多靶点扩增;

· 可省略样本核酸提取步骤,支持粗样本直扩,更快获得可靠结果;

· 适配体热启动配方,快速启动功能并减小错误率;

· 可冻干形式,包含所有冻干所需辅料,更加便捷满足冻干需求。

目录号

产品描述

规格

#4000

PlexTaq® 5x qPCR Multiplex Master Mix

100/500 reactions

 

2. Volcano3G® RT-PCR Probe 2x Master Mix (货号:#6101)

· 独特的工程化聚合酶,兼具反转录活性;

· 极高耐热性,95℃ 半衰期 >40分钟;

· 可至零步法 RT-qPCR  (不含单独反转录程序步骤),更快获得检测结果;

· 无需样本提取或裂解,PCR 过程中的高温会破坏细胞或病毒的膜结构。

目录号

产品描述

规格

#6101

Volcano3G® RT-PCR Probe 2x Master Mix

100/500 reactions

 

 

参考文献:

1. National Human Genome Research Institute. https://www.genome.gov/genetics-glossary/Microarray-Technology.
2. Francesco Damin, Giuseppina Sannino, Audrey Crousilles, Laura Vaahtoranta, Kevin Eboigbodin, Silvia Galbiati, Marcella Chiari.  PlexTaq® 5x qPCR Multiplex Master Mix forMycobacterium tuberculosis detection by microarray.

3. Francesco Damin, Giuseppina Sannino, Marcella Chiari. Volcano3G® RT-PCR Probe 2x Master Mix vs Competitor RT-PCR Master Mix.

 


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